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D(+)-트레할로스 이수화물은 안정한 비환원 이당류이다. 극단적 인 열, 추위, 가뭄과 같은 다양한 환경 적 스트레스 하에서 세포 표면에 보호 필름을 형성하여 생물학적 거대 분자의 구조를 손상으로부터 효과적으로 보호 할 수 있습니다. 그것은 생물학적 세포에 대한 우수한 비특이적 보호 기능을 가지고 있으며 가혹한 조건에 대한 생물학적 세포의 내성을 향상시킬 수 있습니다.
최근, D(+)-트레할로스 이수화물은 항체 약물을 포함하는 생물학적 제품에 널리 사용되고 있다. Adcetris, Padcev, Imjudo, Kimmtrak 등과 같은 시판중인 항체 약물 (ADC 포함) 의 약 30% 보호제로 사용됩니다.
D ()-트레할로스 이수화물은 또한 세포 냉동 보존, 보조 생식 및 기타 분야에서 점점 더 중요한 역할을합니다. 여기에서 AVT의 제품 팀은 관련 연구 진행 상황을 이해하는 데 도움이되는 다음 관련 문헌을 해석합니다.
D(+)-OPC의 냉동 보존을위한 트레할로스 이수화물
탈수초성 질환은 척수 손상 (SCI), 다발성 경화증 (MS) 등과 같은 수초의 손실을 특징으로 하는 신경학적 장애이다.
OPC는 성숙한 oligodendrocytes로 분화 할 수 있습니다생체 내중추 신경계의 중요한 골수화 세포이며 신경 축삭을 캡슐화하여 미엘린 구조를 구성합니다. 따라서, OPC의 이식은 탈수초성 질환에 대한 잠재적인 치료법으로 간주된다.
OPC의 냉동 보존은 인간 OPC의 성공적인 이식에 중요한 단계입니다.
임상적으로 사용되기 전에, 인간 OPC를 100 mL/L DMSO + 900 mL/L FBS의 냉동 보호제로 냉동 보존하였다 (1984 년에 제안된 방법). 70% 에 55% 의 회복 속도. 이 방법은 그 후 오랜 시간 동안 최적화되지 않았다.
DMSO가 세포독성이고 FBS가 면역원성인 것을 고려하면, 상기 저온보존 방법은 임상적 용도에 적합하지 않다.
대규모로 적용 할 수있는보다 경제적이고 효과적이며 안전한 인간 OPC 냉동 보존 방법을 모색하기 위해, southern Medical University의 Liu Chang과 다른 연구자들은 인간 태아 뇌 신경 줄기 세포 (hNSC) 에 의해 유도 된 OPC를 사용하여 위의 방법을 최적화했습니다.
① 다른 방법이 OPC의 회수율에 미치는 영향을 비교하면, 소화에 의해 수집된 세포의 생존율이 기계적 피펫팅에 의한 것보다 현저히 높다는 것이 밝혀졌다.
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표 1: 기계적 파괴 및 소화 방법을 사용하여 Cryopreservation 전후의 세포 생존율 및 회수율
④, 인허탈, 자화합 그룹 기계그룹 소화 그룹
A, B Cryoprotectant A Cryoprotectant B
복구 후 Cryopreservation 진동 전의 viability
② 냉동 상자에서 천천히 냉각하고 증기상 액체 질소 탱크에서 빠른 냉각을 통해 4 개의 다른 냉동 보존 매체로 냉동 보존 된 OPC의 회수율을 비교합니다.
아니. | 냉동 보존 매체 구성 |
A | 70 mL/L DMSO + 930 mL/L FBS를 포함하는 냉동 보존 배지 |
B | HPSC 무혈청 냉동 보존 매체 |
C | 70 mL/L DMSO + 300 mL/L FBS를 포함하는 OPS 완전한 매체 |
D | 70 mL/L DMSO + 100 mL/L FBS + 300 mL/L HES를 포함하는 OPS 완전한 배지 |
E | 70 mL/L DMSO + 300 mL/L FBS + 0.2 mol/mL D ()-trehalose 이수화물을 함유 한 OPS 완전한 배지 |
이하에 나타낸 바와 같이, 2 개의 냉각 속도에 대한 회수율에는 통계적으로 유의한 차이가 있었다. 4 개의 동결보호제의 회수율은 모두 급속 냉각에 의해 30% 미만이었다. D(+)-트레할로스 이수화물을 보충한 냉동 보존 배지 E에 대한 회수율은 냉동 박스에서의 느린 냉각에 의해 가장 높았으며, 이는 (75.73 ± 6.66)% 였다.
③ 냉동 보존 기간이 OPC의 회수율에 미치는 영향 비교
가장 높은 회수율을 가진 냉동 보존 배지 E에서 냉동 보존 된 세포를 후속 실험에서 선택했으며, 회수율은 단기 (<2 개월) 사이에 비교되었습니다. 냉동 보존 및 장기 (6 개월) 냉동 보존으로 두 그룹 간의 회수율에 큰 차이가 없습니다.
④ 세포 증식 활성 비교
세포 증식 비교를 위해 가장 높은 회수율을 갖는 냉동 보존 배지 E를 선택하였다. 평균 증식 배수는 동시에 3 회 연속 통과 후 냉동 보존 배지 E 그룹과 정상 배양 대조군 사이에서 비교되었으며, 두 그룹 사이에는 큰 차이가 없었다. 배양 7 일 후, 정상 배양 그룹과 해동 후 배양 그룹 사이의 증식률에는 유의한 차이가 없었다. 그 결과, OPC의 세포 증식 활성은 동결되지 않은 세포와 필적하는 D(+)-트레할로스 이수화물을 함유하는 냉동 보존 배지로 동결보존된 것으로 나타났다.
이 연구는 소화에 의해 수집 된 hNSC-유도 된 OPC가 70 mL/L DMSO 300 mL/L FBS 0.2 mol/mL D를 함유 한 OPS 완전 배지로 냉동 보존 될 수 있다고 결론지었습니다. (+)-냉동 상자에서 느린 냉각과 빠른 재가열에 의해 오랜 시간 동안 trehalose 이수화물, 평균 회수율은 최대 75% 입니다. 냉동 보존 후 회복은 OPC-특이적 마커 발현 및 증식 능력에 영향을 미치지 않았다.
D ()-trehalose 이수화물은 많은 출처에서 비 독성 세포 막 투과성 냉동 보호제입니다. 이는 hPBSC 및 hESC와 같은 다양한 세포 유형에 대해 우수한 냉동 보존 효과를 갖는 것으로 입증되었다. 이 연구에서, D(+)-트레할로스 이수화물의 낮은 농도로 보충 된 냉동 보존 배지는 모든 실험 그룹에서 가장 높은 회수율을 달성했습니다. 배양 후 증식 및 마커 발현의 결과는 냉동 보존 배지가 D(+) 와 함께 첨가되었음을 나타냅니다.-트레할로스 이수화물은 또한 인간 OPC의 냉동 보존에 적합하고 세포의 회수율을 향상시킬 수 있었다.
